hírek

A Javascript jelenleg le van tiltva a böngészőjében.A webhely egyes funkciói nem működnek, ha a JavaScript le van tiltva.
Regisztráljon konkrét adataival és az érdeklődésre számot tartó gyógyszerrel, és az Ön által megadott információkat a kiterjedt adatbázisunkban található cikkekkel párosítjuk, és azonnal elküldjük Önnek egy PDF másolatot.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, fertőző betegségek osztálya, Suzhou University First Affiliated Hospital, Suzhou City, Jiangsu tartomány, 215000 Tel.emésztőrendszeri daganatok 5 éves teljes túlélése 14,1%.Sok HCC-s beteget előrehaladott stádiumban diagnosztizálnak, ezért a korai szűrés elengedhetetlen a HCC-ből eredő mortalitás csökkentése érdekében.Az általánosan használt kimutatási mutatók mellett, mint például a szérum alfa-fetoprotein (AFP), a lencse lektinreaktív alfa-fetoprotein (AFP-L3) és a kóros protrombin (K-vitamin-hiány által kiváltott protein II, PIVKA-II), folyadékbiopsziás technikák Diagnosztikai értékűnek bizonyult a HCC kimutatásában.Az invazív eljárásokhoz képest a folyadékbiopsziával kimutathatóak a keringő rosszindulatú metabolitok.A folyadékbiopsziás technikák kimutatják a keringő daganatsejteket, a keringő tumor DNS-t, a keringő RNS-t és az exoszómákat, és a HCC korai szűrésére, diagnosztizálására és prognosztikai értékelésére használják.Ez a cikk áttekinti a molekuláris biológiát és a különféle folyadékbiopsziás technikák alkalmazását ígéretes biomarkerek izolálására, amelyek életképes lehetőségek lehetnek a HCC korai értékelésére a magas kockázatú HCC csoportok korai szűrésének javítása érdekében.Kulcsszavak: folyadékbiopsziás technika, hepatocelluláris karcinóma, magas kockázatú csoport.
A hepatocelluláris karcinóma (HCC) az emésztőrendszer gyakori rosszindulatú daganata, amely mind a férfiak, mind a nők körében a hatodik helyen áll a rosszindulatú daganatok új esetei között.1 Világszerte a májrák a tüdőrák és a vastagbélrák után a harmadik vezető halálok, amely az összes rosszindulatú daganatból eredő rákkal összefüggő halálozások 8,3%-át teszi ki.1 A HCC prognózisa szorosan összefügg a diagnózis felállítási stádiumával.A HCC-ben a rossz túlélés fő okai az intrahepatikus áttétek, a portális vénás tumor trombusai és a távoli áttétek, amelyek kizárják a reszekciót, és ezek közül a jellemzők közül sok már a diagnózis idején is jelen van a betegekben.
A diagnosztikai és kezelési irányelvek alapján a HCC kialakulásának fő kockázati tényezői a májcirrózis, a krónikus hepatitis B vírus (HBV) vagy a hepatitis C vírus (HCV) fertőzés, az alkoholos zsírmájbetegség és a nem alkoholos zsírmájbetegség (NAFLD) ).2 Ezenkívül a HCC kockázati tényezői közé tartozik az aflatoxinnal szennyezett táplálékfelvétel, a schistosomiasis, a cirrhosis egyéb okai, a családban előfordult májrák, cukorbetegség, elhízás, dohányzás és gyógyszer okozta májkárosodás.A 35 és 45 éves magas kockázatú csoportoknak rendszeres orvosi vizsgálaton kell részt venniük.A korai szűrés fontos korai kezelési stratégia a HCC-ben szenvedő betegek általános túlélésének javítása érdekében.
A HCC3,4 korai szűrésére olyan biomarkereket ajánlunk, mint az AFP, AFP-L3 és PIVKA-II.A folyékony biopsziás technikák ígéretes eredményeket mutattak a korai diagnózis és a kezelés értékelése terén.5,6 Jelentős előrelépés történt a HCC folyadékbiopsziában, amely nagyobb szenzitivitással és specificitással rendelkezhet, mint az általánosan használt szérummarkerek, például az AFP (1. táblázat).
Az AFP egy széles körben használt biomarker a HCC-ben, és jelenleg a legrészletesebb biomarker, amelyet széles körben használnak a betegség korai szűrésére, diagnosztizálására és értékelésére.A tartósan emelkedett AFP-szint a HCC progressziójának kockázati tényezője.7,8 A kis hepatocelluláris karcinóma (sHCC) kimutatási aránya az ultrahang és a számítógépes tomográfia fejlődésével növekszik, és az AFP-ről kiderült, hogy a klinikai gyakorlatban különösen érzéketlen a hHCC kimutatására.Egy retrospektív multicentrikus vizsgálat9 szerint az AFP pozitív a HCC esetek 46%-ában (616/1338), az sHCC esetek 23,4%-ában (150/641) volt.Ezenkívül az AFP szintje emelkedett krónikus májbetegségben és cirrhosisban szenvedő betegeknél.10 Így az AFP korlátozott szűrőhatással rendelkezik az sHCC-re.11 Az Asia-Pacific Clinical Practice Guidelines for Hepatocellularis Carcinoma szerint az AFP alkalmazása nem javasolt.12 Klinikai bizonyítékok arra utalnak, hogy a PIVKA-II jobb, mint az AFP a HCC kezelésében, és hogy a PIVKA-II és az AFP kombinációja magasabb diagnosztikai érték a HCC-ben.13 A szövetbiopsziához képest a folyadékbiopszia elsősorban a testfolyadékokban (vérben, nyálban, pleurális folyadékban, agy-gerincvelői folyadékban vagy vizeletben) észleli a daganathoz kapcsolódó metabolitokat, és kevésbé invazív a szövetekre.14 Ezenkívül a folyékony biopsziák olyan rosszindulatú jellemzőket is tükrözhetnek, amelyek az elsődleges daganatszövetben nem jelennek meg.15 A folyékony biopsziát a klinikai gyakorlatban még nem vizsgálják minden daganattípusra, de diagnosztikai potenciáljuk rákban felkelti az onkológusok figyelmét.16 A folyadékbiopszia kimutathatja a keringő tumorsejteket (CTC), a keringő tumor DNS-t (cDNS), a keringő szabad RNS-t (ecRNS) és az exoszómákat.Ebben a cikkben a különböző folyadékbiopsziás technikák jellemzőit, szerepét és alkalmazását tárgyaljuk a magas kockázatú HCC csoportok korai szűrésében.
Az extracelluláris DNS-t (cfDNS) egészséges egyének vérmintáiban először Mandel és munkatársai írták le 1948-ban.A 17 cfDNS egy körülbelül 160-180 bp hosszúságú, sejtmentes DNS-fragmens, amely elsősorban limfocitákból és mieloid sejtekből származik.A ctDNS a tumorsejtek által a perifériás vérbe felszabaduló specifikus mutáns DNS-fragmentum, amely a tumorsejtek genomiális információit reprezentálja bizonyos patofiziológiai folyamatok, köztük a nekrózis, apoptózis és kiválasztódás után.A ctDNS aránya a teljes cfDNS-ben nagymértékben változik a tumor típusától függően, és a cDNS-fragmensek a jelentések szerint általában 167 bp-nál rövidebbek.18 Underhill tanulmánya kimutatta, hogy a cfDNS fragmentumok általában rövidebbek, mint a normál cfDNS.19 Az egészséges egyénekhez képest a daganatos betegek vérében a cfDNS fragmentumok összhossza rövidebb, így a cfDNS a korai daganatszűrés indikátoraként használható.A cfDNS-fragmensek bizonyos részhalmazainak feldúsítása javíthatja a nem áttétes szolid tumorokhoz kapcsolódó cDNS kimutatását.Tanulmányok kimutatták, hogy a ctDNS az előrehaladott hasnyálmirigy-, vastagbél-, húgyhólyag-, gasztrointesztinális-, máj-, petefészek-, emlő-, melanoma-, valamint fej-nyakrák több mint 75%-ában megtalálható.20,21 A vérben lévő ctDNS mennyisége azonban a daganat helyétől függ.22 Bettegoud tanulmányában vastag- és végbélrákos, emlő-, máj-, tüdő- és prosztatarákos betegek vérében magasabb cDNS-szintet találtak, mint más rákos megbetegedésekben.Ezzel szemben a szájüregi rákos, hasnyálmirigyrákos, gyomorrákos és gliómás betegeknél a vér cDNS-koncentrációja alacsonyabb volt.huszonegy
Mivel a ctDNS ugyanazokat a genetikai mutációkat tartalmazza, mint az elsődleges tumorsejtek, a cDNS felhasználható heterogén tumorspecifikus mutációk és epigenetikai változások kimutatására, beleértve a metilációt, a hidroximetilációt, az egynukleotidos variációkat és a kópiaszám-variációkat.huszonhárom
A DNS-metiláció az egyik leggyakoribb epigenetikai változás, amely génrepressziót eredményez.A normál sejtekhez képest különbségek vannak a tumorsejt genomjának általános metilációs szintjében, különösen a tumorszuppresszor gének metilációjában, ami korai stádiumban kimutatható, ami arra utal, hogy a DNS-metilációban bekövetkező változások a korai stádium jelzői lehetnek. tumorigenezis kimutatása.A HCC-vel kapcsolatos tumorszuppresszor gének a promoter metilációjával inaktiválhatók, ezáltal stimulálva a tumorgenezist.24 A DNS-metiláció ideális marker a daganatok korai diagnosztizálásához szövetspecifitása, kimutathatósága és korfüggetlensége miatt.Ezenkívül a DNS-metiláció gyakoribb a szomatikus mutációkhoz képest, mivel a célgenom minden régiójában több célrégió és több megváltozott CpG hely található.25 Több CpG hely mellett nagyszámú független hipermetilált lókuszt azonosítottak a ctDNS-ben a DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 és RGS10.26 Xu et al.1098 HCC-s beteg és 835 egészséges kontroll cfDNS-mintáinak összehasonlítása azt találta, hogy a HCC-vel asszociált gének erősen korrelálnak a megfelelő plazma cDNS-metilációs aláírásokkal.25 Laboratóriumi elemzések alapján egy prediktív modellt fejlesztettek ki, amely 10 metilációs markert tartalmazott, amelyek szenzitivitása és specificitása rendre 85,7%, illetve 94,3%, és ezek a markerek erősen korreláltak a tumor tömegével, a tumor stádiumával és a kezelésre adott válaszokkal.Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a cDNS-metilációs markerek alkalmazása nagy ígéretet jelent a HCC diagnózisában, monitorozásában és prognózisában.A Lu és munkatársai27 által bemutatott három rendellenesen metilált génből (APC, COX2, RASSF1A) és egy miRNS-ből (miR203) álló metilációs modellben a 27-es modell érzékenysége és specificitása a HBV-asszociált HCC diagnosztizálására összehasonlítható volt.80%.Ezenkívül a modell a nem diagnosztizált HCC-s betegek 75%-át tudta kimutatni, akiknek AFP szintje 20 ng/ml.A Ras-asszociált doméncsalád 1A fehérje (RASSF1A) génje a fő ismétlődő DNS-szekvencia az emberi genomban.Araujo et al.arra a következtetésre jutott, hogy a RASSF1A promoter hipermetilációja értékes biomarker lehet a HCC korai szűrésében, és potenciális molekuláris célpont lehet az epigenetikai terápia számára.28 Egy vizsgálatban a szérum RASSF1A promoter hipermetilációját a HCC-ben szenvedő betegek 73,3%-ánál találták.29 A hosszú interpersed nukleotid elem 1 (LINE-1) egy másik nagyon aktív retrotranszpozíciós mediátor.A LINE-1 hipometilációját a HCC szérumminták 66,7%-ának DNS-ében találták meg, és korai kiújulással és a radikális reszekció utáni rossz túléléssel járt együtt.29 A hipermetiláció egy gyakori genetikai folyamat, amely egyedülálló szerepet játszik a májcirrhosis és a HCC kialakulásában.30 Ezzel szemben a hidroximetiláció egy demetilációs folyamat, amely génreaktivációt és expressziót indukál, és az 5-hidroximetilcitozin (5-hmC) termék kimutatása ebben a folyamatban felhasználható daganat azonosítására.A cDNS metilezése és hidroxi-metilezése összefüggésben áll a daganatképződéssel, és hozzájárulhat a HCC korai szűréséhez.Egy 2554 alany bevonásával végzett vizsgálat során 31 genomszintű 5-hmC-t találtak cfDNS-mintákban, és 32 gént azonosítottak az 5-hmC szekvenciák összehasonlításával HCC-betegekben és magas kockázatú csoportokban, például krónikus betegségekben szenvedőkben.A májbetegségek diagnosztikai modelljei.és cirrózis.Ez a modell felülmúlta az AFP-t abban, hogy megkülönböztesse a HCC-t a nem daganatos szövetektől.
A kódoló régiókban bekövetkező mutációk transzkripciós rendellenességekhez vezethetnek, ami a fehérjeszekvenciák megváltozásához és végső soron rák kialakulásához vezethet.Az egynukleotidos variánsok fontos genomi markerek a korai tumorszűréshez, mivel nagy szöveti megbízhatóságuk, valamint nagy tumor- és szövetspecifitásuk.Számos HCC-vel kapcsolatos tanulmány, amely a következő generációs szekvenálást (NGS) alkalmazta a rák exome és teljes genom szekvenálására, olyan gyakori mutált sejtgéneket azonosított, mint a TP53 és a CTNNB1, valamint számos, köztük az ARID1A, MLL, IRF2.Az új gének, az ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 és JAK1 mérsékelt mutációs rátát mutatnak. A mutáns génfunkció elemzése azt sugallja, hogy a kromatin remodelling, a Wnt/β-catenin és a JAK/STAT jelátvitel, a P53-sejtciklusút, az epigenetikai módosítók, az oxidatív stressz útvonalak, a PI3K/AKT/MTOR útvonal és a RAS/RAF/ A MAPK kináz útvonal döntő szerepet játszik a HCC onkogenezisében.32,33 Egy olyan vizsgálatban, amelyben daganathoz kapcsolódó mutációkat mutattak ki, Huang és munkatársai azt találták, hogy a ctDNS-től függő tumorral összefüggő mutációk gyakorisága 19,5%, a specificitás pedig 90% volt. .34 Ezenkívül az érinvázión átesett betegeknél nagyobb volt a ctDNS-mutációk (P=0,041) és a kiújulásmentes túlélés valószínűsége (P<0,001). A mutáns génfunkció elemzése azt sugallja, hogy a kromatin remodelling, a Wnt/β-catenin és a JAK/STAT jelátvitel, a P53-sejtciklusút, az epigenetikai módosítók, az oxidatív stressz útvonalak, a PI3K/AKT/MTOR útvonal és a RAS/RAF/ A MAPK kináz útvonal döntő szerepet játszik a HCC onkogenezisében.32,33 Egy olyan vizsgálatban, amelyben daganathoz kapcsolódó mutációkat mutattak ki, Huang és munkatársai azt találták, hogy a ctDNS-től függő tumorral összefüggő mutációk gyakorisága 19,5%, a specificitás pedig 90% volt. .34 Ezenkívül az érinvázión átesett betegeknél nagyobb volt a ctDNS-mutációk (P=0,041) és a kiújulásmentes túlélés valószínűsége (P<0,001).A mutáns génfunkció elemzése azt sugallja, hogy a kromatin-átalakítás, a Wnt/β-catenin és a JAK/STAT jelátvitel, a P53 sejtciklusút, az epigenetikai módosítók, az oxidatív stressz útvonalak, a PI3K/AKT/MTOR útvonal és a RAS/RAF/MAPK kináz útvonal változásai játszanak szerepet. kritikus szerepet játszik a HCC tumorigenezisében.32,33 Egy tanulmányban, amely tumorhoz kapcsolódó mutációkat talált, Huang et al.azt találta, hogy a ctDNS-függő tumorhoz kapcsolódó mutációk gyakorisága 19,5%, a specificitás pedig 90%..34 Кроме того, у пациентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДДНК,0жжвстна, 0,02,041 (P=0,041) .34 Ezen túlmenően, a vaszkuláris invázióban szenvedő betegek több cDNS-mutációt mutattak (P=0,041), és rövidebb volt a betegségmentes túlélés (P<0,001).A mutáns gének funkcionális elemzése kromatin átalakulást, Wnt/β-catenin és JAK/STAT jelátvitelt, a P53 sejtciklus útvonalat, epigenetikai módosítókat, az oxidatív stressz útvonalat, a PI3K/AKT/MTOR útvonalat és a RAS/RAF/MAPK útvonalat tárta fel. A kináz útvonal kritikus szerepet játszik a HCC onkogenezisében. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 的 中 ， ， ， 等 人 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 依赖于 依赖于 的 频率 为 为 为 ， ， ， 有 更 有 有 有 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 可能 发生 ， ， ， ， 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）. 32,33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， ， ， 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 的 为 为 为 19,5% ， 特异性 为 为 为 为 此外 血管 侵犯 的 更 可能 发生 发生 发生 突变 突变 （（（（（（（（（（（（（（P = 0,041） 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 f短的无复发生存期（P<0,001）.32,33 Egy tanulmányban, amely tumorhoz kapcsolódó mutációkat talált, Huang et al.azt találták, hogy a tumorral összefüggő mutációk 19,5%-ban cDNS-től függnek, 90%-os specificitás mellett.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutáció (P=0,041) és rövidebb betegségmentes túlélés (P<0,001).Egy másik gyakori HCC driver gén a TP53, amelynek mutációs rátája meghaladja a 30%-ot.Tanulmányok kimutatták, hogy a TP53 mutációk gyakorisága a ctDNS-ben a vérben és a vizeletben 5% és 60% között mozog.35 Johan tanulmánya kimutatta, hogy a késői HCC ctDNS mutációs spektruma hasonló mutációs rátával rendelkezik, mint a korai HCC, beleértve a TERT promotert (51%), TP53-at (32%), CTNNB1-et (17%), PTEN-t (8%), mutációkat AXIN1 ., ARID2, KMT2D és TSC2 (egyenként 6%).36 A β-catenin (CTNNB1) onkogén fontos szerepet játszik a Wnt jelátviteli útvonalban.A CTNNB1 transzkripciós koaktivátor elősegítheti a génexpressziót, ami sejtproliferációhoz, az apoptózis gátlásához és angiogenezishez vezethet.A CTNNB1 kölcsönhatásba léphet a TERT-vel is, hogy májsejt-transzformációt indukáljon.33 A TERT promoter gyakran mutációt mutat egyes szolid tumorokban.A TERT-ben, a HCC rosszindulatú átalakulásának egyik legkorábbi genetikai változásában bekövetkezett változások a cirrhoticus májsejtekben a telomeráz reaktivációjához vezethetnek, és elősegíthetik a proliferációt és megakadályozhatják az öregedést.A 33-37 TERT promoter mutációiról számoltak be a proliferatív májcsomókban és korai HCC-ben szenvedő betegek 59-90%-ánál, és ezek a túléléshez kapcsolódnak.38
A kópiaszám-változások (CNA) a szomatikus mutációk egyik fontos altípusa.A kutatások kimutatták, hogy a CNA széles körben elterjedt és fókuszban lévő terhelése egy genomiális aláírás, amely képes előre jelezni a tumor immuninfiltrációját és kizárását bizonyos ráktípusokban.39 Aktív infiltrációs jelátvitel, magas citolitikus aktivitás, súlyos gyulladás és genetikai markerek, amelyek az antigénprezentációhoz kapcsolódnak HCC-ben.Az egynukleotidos polimorfizmusok adattömbjének elemzése 477 alanyban a központi idegrendszer alacsony terhelését mutatta ki.Ezzel szemben a nagy kiterjedt CNS-terhelésű kromoszómálisan instabil tumorok immunkilökődés jeleit mutatták, és proliferációval, DNS-javítással és TP53 diszfunkcióval jártak együtt.Xu et al.kimutatták, hogy a HCC csoport magasabb CNA pontszámot mutatott, mint a krónikus májbetegség csoportja.40 Egyetlen sejt teljes genomjának szekvenálásával azt találták, hogy a CNS-ek a hepatokarcinogenezis korai szakaszában jelennek meg, és viszonylag stabilak maradnak a tumor progressziója során.41 Chung et al.azt találták, hogy a cfDNS-szintek szignifikánsan megemelkedtek HCC-s betegekben, és a cfDNS-ben lévő genom-szintű CNS-ek fontos független prognosztikai markerek voltak a sorafenibbel kezelt HCC-s betegekben.42 Azoknál a betegeknél, akiknél nagyobb volt a CNA-terhelés, nagyobb volt a betegség progressziójának és halálának valószínűsége, mint azoknál, akiknél alacsonyabb volt a CNA-terhelés.Ollerich et al.megállapították, hogy a kópiaszám instabilitási indexe (CNI) felhasználható a CNA értékelésére rákos betegek cfDNS-ében.Megállapították, hogy az előrehaladott rákban szenvedő betegeknél szignifikánsan magasabb volt a CNI pontszám, mint egy kontrollcsoportban, amely a betegek szisztémás kemoterápiára és immunterápiára adott válaszát értékeli.43 Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a folyékony biopsziás mintákban talált CNS-ek prognosztikai indikátorként szolgálhatnak előrehaladott rákos betegeknél.HCC a szisztémás terápia hátterében.
Jelenleg a ctDNS kimutatására használt módszerek célzott és nem célzott módszerekre oszthatók.Röviden, a célzott módszerek, mint például a digitális polimeráz láncreakció (dPCR), a BEAMing digitális PCR, az amplifikációs refrakter mutációs rendszer-PCR, a Capp-Seq és a Tam-Seq nagyon érzékenyek az előre meghatározott génekre.A célon kívüli módszerek, például a teljes genom szekvenálása és az NGS átfogó képet adnak a teljes genomi tájról.44 A teljes genom szekvenálása a célpanelekkel összehasonlítva nemcsak pontmutációkat és inszerciókat, hanem átrendeződéseket és kópiaszám-variációkat is képes kimutatni.prognózis, a CTC és a cfDNS pedig jó indikátorok, amelyek felhasználhatók a HCC dinamikus monitorozására.45 Ezenkívül a cfDNS elemzés hasznosabb lehet a HCC kimutatásában.Yan és mtsai.kimutatták, hogy a HCC-s betegek plazmájában a cfDNS szignifikánsan magasabb volt, mint a májfibrózisban szenvedő betegek és az egészséges kontrollok esetében.Az AFP-hez képest a ctDNS várhatóan jobb szűrési markere lesz a korai HCC-re.46 Egy 47 folyékony biopsziával végzett prospektív vizsgálatban, amelyek cfDNS-t és fehérjét vizsgáltak egy populációban, hatékonynak bizonyultak a HCC-s betegek és a HCC nélküli betegek megkülönböztetésében.331 ultrahangos normál és AFP-negatív beteg követése során a cfDNS szenzitivitása és specificitása a HCC diagnosztizálására 100%, illetve 94% volt, így a cDNS képes volt kimutatni a HCC-t tünetmentes HBsAg szeropozitív egyénekben.A Yeo48 vizsgálatban magas gyakorisággal (92,5%) találták a RASSF1A promoter hipermetilációját HCC-ben szenvedő betegeknél.Ezenkívül Xu és mtsai.diagnosztikai modellt hozott létre a HCC előrejelzésére specifikus metilációs markerek paneljének felhasználásával 90,5%-os és 83,3%-os specificitással és érzékenységgel.A panel lehetővé teszi a HCC-ben szenvedő betegek megkülönböztetését más májbetegségben szenvedő betegektől, ami jobb, mint az AFP.Azt is megállapították, hogy a normál kontrollok, amelyek pozitívnak bizonyultak, a HCC kockázati tényezőivel rendelkezhetnek, mint például a HBV-fertőzés vagy az alkoholfogyasztás.25 Feltételezzük, hogy a HCC magas kockázati tényezői elősegíthetik a cfDNS hipermetilációját, ami azután hozzájárul a HCC progressziójához, és így a cfDNS kulcsszerepet játszhat a magas kockázatú csoportok szűrésében.Cai et al.összefoglalja a ctDNS mutációk teljes skáláját, és robusztus stratégiát kínál a betegek daganatterhelésének felmérésére.49 Ez a stratégia a képalkotó változás előtt átlagosan 4,6 hónappal képes azonosítani a tumorigenezist, és jobb diagnosztikai teljesítményt mutatott az AFP, AFP-L3 és PIVKA-II szérum biomarkerekhez képest.A cDNS-teszt diagnosztikus értékét akkor igazolták, amikor képértékelés nem áll rendelkezésre, így a cDNS-teszt értékes a korai HCC diagnózisában a magas kockázatú csoportokban.A közelmúltban a tudósok az NGS-technológiát használták a többváltozós genetikai variáció indikátorainak (beleértve az 5-hidroxi-metil-citozint, az 5'-motívumot, a fragmentációt, a nukleoszómanyomokat, a HIFI-t) elemzésére 3204 klinikai mintában és cfDNS-ben.50 újravalidált HIFI modell három független vonat-, teszt- és tesztkészlettel stabil és megbízható megkülönböztetést mutatott a HCC és a nem HCC populációk között 95,79%-os, illetve 95,42%-os érzékenységgel a HCC-specifikus teszt- és tesztkészletekben.A nemek 95,00% és 97,83% voltak.A HIFI módszer diagnosztikus értéke magasabb, mint az AFP-é a HCC és a cirrhosis megkülönböztetésében.Ezenkívül a ctDNS-t sebészeti kezelésben is használják.Atsushi et al.meghatározta a ctDNS preoperatív szérumszintjét HCC-s betegekben, és azt találta, hogy a recidíva és az extrahepatikus metasztázis aránya a cDNS pozitív csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a cDNS negatív csoportban, és a cDNS szintek szignifikánsan korreláltak.daganat progressziójával.51 Rendkívül érzékeny biomarker lévén a ctDNS képes előre jelezni a HCC erekbe való behatolási képességét.Wang és mtsai.46 HCC-s beteg teljes genom szekvenálását végezte el, és a többváltozós analízis azt mutatta, hogy a cDNS-változat allélgyakoriságának küszöbértéke a mikroerekbe való invázió szempontjából 0,83%, szenzitivitás 89,7%, specificitása 80,0%.a mikrovaszkuláris invázió független kockázati tényezője reszekálható HCC-ben, ami arra utal, hogy a cDNS segíthet az optimális kezelésben.Összefoglalva, a ctDNS teljes mértékben részt vesz a HCC előfordulásában és kialakulásában, és felhasználható korai szűrésre, műtéti értékelésre és a betegség monitorozására.
A CTC-k olyan rosszindulatú sejtek, amelyek primer daganatokból vagy metasztázisokból származnak, amelyek áttétet adnak a véráramba.A daganatsejtek mátrix metalloproteinázokat (MMP) választanak ki, amelyek lebontják az alapmembránt, lehetővé téve a daganatsejtek közvetlen bejutását a vér- és nyirokerekbe.A legtöbb CTC azonban gyorsan eliminálódik anoikis, immuntámadás vagy nyírófeszültség hatására.53 Az epiteliális-mezenchimális átmenet (EMT) lehetővé teszi, hogy a CTC-ket könnyen izolálják az elsődleges tumorszövetből, behatoljanak a kapillárisokba, és jelentősen javuljon a túlélés, a metasztázis, az invazivitás és a gyógyszerrezisztencia.Tanulmányok kimutatták, hogy az elsődleges metasztatikus daganatokban a különböző tumorsejtek között mélységes heterogenitás van.Így a CTC elemzés a tumorsejtek heterogenitásának átfogó megértéséhez vezethet.54
A HCC-vel kapcsolatos CTC-k specifikus markerei közé tartozik a glipikán-3 (GPC3), az aszialoglikoprotein receptor (ASGPR), az epiteliális sejt adhéziós molekula (EpCAM) és az őssejt-asszociált markerek, mint például a CD44, CD90, 55 és az intercelluláris adhéziós molekula 1 (ICAM11).) .56 A GPC3 marker egy sejtmembránhoz rögzített fehérje, amelyet klinikailag a HCC patológiás elemzésére és jellemzésére használnak.57 A GPC3 expressziója gyakoribb a közepes és alacsony differenciálódású HCC tumorsejtekben, és elősegíti az extrahepatikus migrációt;emellett a GPC3+ CTC-k jelenléte metasztatikus HCC-re utal.58 Az ASGPR egy transzmembrán fehérje, amely csak a hepatociták felszínén expresszálódik, és erősen expresszálódik a jól differenciált HCC-ben.Az EpCAM az egyik leggyakrabban használt membrán-asszociált fehérje a CTC-k rögzítésére.Az EpCAM-ot az őssejtjellemzőkkel rendelkező HCC sejtek felszíni markereként azonosították,59 ami korrelál a HCC különböző klinikopatológiai jellemzőivel, mint például a vaszkuláris invázió, a mért AFP-szint és a májrák előrehaladott stádiuma a Barcelonai Kórházban (BCLC).A 60 CTC EMT fenotípus erősen metasztatikus.54 EMT folyamat a CTC-ben elősegíti a HCC metasztázisát.Az EMT-markerek, például a vimentin, a twist, az E-box cink ujjkötés (ZEB) 1, a ZEB2, a csiga, a meztelen csiga és az E-cadherin expresszióját HCC-betegek májeredetű CTC-iben tanulmányozták.58 A Cheng által kifejlesztett CanPatrol™ rendszer [61] a CTC-ket három fenotípusos alcsoportba sorolta túlnyomórészt kifejezett markerek alapján: epiteliális fenotípus (EpCAM, CK8/18/19), mezenchimális fenotípus (vimentin, tekercses) és kevert fenotípusok.176 betegnél a teljes CTC jobb volt az AFP-nél a HCC és a jóindulatú májbetegség megkülönböztetésében.A teljes CTC, AFP, valamint az összesített teljes CTC és AFP AUC értéke 0,774 (95% CI, 0,704–0,834), 0,669 (95% CI, 0,587–0,750) és 0,821 (95% CI, 0,78866–0). ).), ill.Az EMT-n alapuló CTC besorolás előre jelezheti a HCC diagnózisát, a korai kiújulást, a metasztázisokat és a rövidebb időtartamot.
Jelenleg a CSC-k kimutatására szolgáló módszerek közé tartoznak a fizikai módszerek és a biológiai módszerek.A fizikai módszerek, amelyeket gyakran biofizikai tulajdonságokon alapuló dúsításnak neveznek, főként a CSC fizikai tulajdonságaitól függenek, mint például a méret, a sűrűség, a töltés, a mobilitás és a deformálhatóság.A fizikai tulajdonságoktól függően különféle módszerek léteznek, mint például szűrésen alapuló rendszerek, dielektroforézis stb. Az utóbbi, más néven immunaffinitás alapú dúsítás, főként antigén-antitest kötődésen alapul, mivel a módszer tumorspecifikus biomarkerek elleni antitesteket használ. mint például az EpCAM, ASGPR, humán epidermális növekedési faktor receptor 2 (HER2), prosztata specifikus antigén (PSA), humán pancitokeratin (P-CK) és karbamoil-foszfát-szintáz 1 (CPS1).62 Egy másik típus, az úgynevezett dúsítás nélküli módszer, áramlási citometriát használ a CTC-k megkülönböztetésére a leukocitáktól a magasabb sejtmag-citoplazma arány és méret alapján.Jelenleg az egyetlen, az FDA által jóváhagyott teszt a CTC-k kimutatására a Cell-Search™ rendszer, amely az EpCAM sejtfelszíni markert használja. A kombinált marker alapú CTC kimutatás azonban növelheti a pozitivitás arányát.54 Az ASGPR és CPS1 elleni antitestek keveréke 91%-os CTC kimutatási arányt ért el HCC-s betegekben.63 Zhang és munkatársai egy CTC-Chipet használtak ASGPR elleni antitestekkel, P. -CK és CPS1, és 100%-os arányban megkülönböztette a HCC-s betegeket a jóindulatú májbetegségben vagy a nem-HCC-rákban szenvedőktől.64 Wang egy tanulmánya 42 HCC-beteg 60%-ánál mutatott ki EpCAM+ CTC-ket, és szignifikáns összefüggést talált mindkét pozitivitás között. aránya és a TNM stádiumú CTC-k száma.65 Guo és munkatársai azt találták, hogy a CTC-eredetű PCR-pontszám 125/171 (73%) betegnél emelkedett, akiknek AFP szintje <20 ng/ml volt, 72,5%-os érzékenységgel és 95,0%-os specificitás, szemben az AFP 57,0%-ával és 90,0%-ával 20 ng/ml határérték mellett.66 Az AFP és a CTC-k kombinációja javíthatja a HCC kimutatását.45 Úgy gondolják, hogy a CTC-k előnyt jelentenek az AFP-vel szemben a csoportok korai szűrésében. magas kockázatú a HCC számára. A kombinált marker alapú CTC kimutatás azonban növelheti a pozitivitás arányát.54 Az ASGPR és CPS1 elleni antitestek keveréke 91%-os CTC kimutatási arányt ért el HCC-s betegekben.63 Zhang és munkatársai egy CTC-Chipet használtak ASGPR elleni antitestekkel, P. -CK és CPS1, és 100%-os arányban megkülönböztette a HCC-s betegeket a jóindulatú májbetegségben vagy a nem-HCC-rákban szenvedőktől.64 Wang egy tanulmánya 42 HCC-beteg 60%-ánál mutatott ki EpCAM+ CTC-ket, és szignifikáns összefüggést talált mindkét pozitivitás között. aránya és a TNM stádiumú CTC-k száma.65 Guo és munkatársai azt találták, hogy a CTC-eredetű PCR-pontszám 125/171 (73%) betegnél emelkedett, akiknek AFP szintje <20 ng/ml volt, 72,5%-os érzékenységgel és 95,0%-os specificitás, szemben az AFP 57,0%-ával és 90,0%-ával 20 ng/ml határérték mellett.66 Az AFP és a CTC-k kombinációja javíthatja a HCC kimutatását.45 Úgy gondolják, hogy a CTC-k előnyt jelentenek az AFP-vel szemben a csoportok korai szűrésében. magas a HCC kockázata.A CTC-k marker alapú kombinált kimutatása azonban növelheti a pozitív eredmények százalékos arányát.54 Az anti-ASGPR és CPS1 antitestek keveréke 91%-os CTC kimutatási arányt ért el HCC-ben szenvedő betegeknél.63 Zhang et al.ASGPR, P-CK és CPS1 elleni antitestekkel rendelkező CTC-Chipet használt, és 100%-os arányban megkülönböztette a HCC-s betegeket a jóindulatú májbetegségben szenvedőktől vagy a nem-HCC-től.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. a TNM stádiumú CTC-k gyakorisága és száma.65 Guo és munkatársai azt találták, hogy a CTC-kből származó PCR 125/171 (73%) betegnél emelkedett, akiknek AFP szintje <20 ng/ml volt, érzékenysége 72,5%, specificitása pedig 95,0% az AFP 57,0%-hoz és 90,0%-hoz képest 20 ng/ml határérték mellett.66 Az AFP és a CTC kombinációja javíthatja a HCC kimutatását.45 A CTC-k előnyt jelentenek az AFP-vel szemben a korai szűrésben csoportok.magas HCC kockázattal.A CTC-k marker alapú kombinált kimutatása azonban növelheti a pozitív eredmények százalékos arányát.54 Az anti-ASGPR és CPS1 antitestek keveréke 91%-os CTC kimutatási arányt ért el HCC-ben szenvedő betegeknél.63 Zhang et al.ASGPR, P-CK és CPS1 elleni antitestekkel rendelkező CTC chipeket használtak, és 100%-kal megkülönböztették a HCC-s betegeket a jóindulatú májbetegségtől és a nem HCC-től.64 Wang tanulmánya az EpCAM+ CTC-k 60%-át azonosította 42 HCC-s betegnél, és szignifikáns összefüggést talált a TNM stádiumban lévő CTC-k előfordulása és száma között. 65 Guo 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， CTC 衍生 的 PCR 评分 ， ， 敏感性 为 为 72,5%， 特异性 为 95,0%， 而 afp 在 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 在值为20 ng/ml 时的特异性为57.0% 和90.0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 为 为 为 为 为 为 时 时 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%。。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. azt találták, hogy 125/171 (73%) betegnél, akiknek AFP szintje <20 ng/ml, a CTC-eredetű PCR értékek 72,5%-os szenzitivitással és 95,0%-os specificitással emelkedtek, míg az AFP a cut-off specificitáson volt. 20 ng/ml volt.ml 57,0% és 90,0%.66 Az ORP és a CTC kombinációja javítja a HCC kimutatását.Úgy gondolják, hogy a 45 CTC jobb az AFP-nél a magas kockázatú HCC-populációk korai szűrésében.Ezért a CTC-pozitív és a magas kockázatú HCC-csoportok esetében a CTC-tesztet rutinszerűen kombinálni kell ultrahanggal és AFP kimutatással.A CTC-ket azonban a tumormetasztázisok és a kiújulás fontos előrejelzőinek tekintik, és a CTC-k kimutatása önállóan nem javasolt diagnosztikai eszközként.62 Ezért a CTC jobb prediktív biomarkerként szolgálhat, mint a többi jelenleg használt marker. Zhou és munkatársai azt találták, hogy a megnövekedett számú EpCAM+ CTC-vel és szabályozó T-sejtekkel rendelkező betegeknél nagyobb volt a HCC kiújulásának kockázata, mint azoknál, akiknél alacsony a CTC-k száma, a kiújulási arány 66,7% vs 10,3% (P < 0,001).67 Hasonló vizsgálatról számoltak be Zhong és munkatársai.68 Ezenkívül Qi azt találta, hogy 112 HCC-s beteg közül 101 (90,81%), köztük a korai stádiumú betegségben szenvedők is, pozitívak voltak CTC-re, és nagyon kicsi HCC-csomókat észleltek 3 után. 5 hónapos követésig. Zhou és munkatársai azt találták, hogy a megnövekedett számú EpCAM+ CTC-vel és szabályozó T-sejtekkel rendelkező betegeknél nagyobb volt a HCC kiújulásának kockázata, mint azoknál, akiknél alacsony a CTC-k száma, a kiújulási arány 66,7% vs 10,3% (P < 0,001).67 A Zhong és munkatársai hasonló vizsgálatról számoltak be.68 Ezenkívül Qi azt találta, hogy 112 HCC-s beteg közül 101 (90,81%), köztük a korai stádiumú betegségben szenvedők is, pozitívak voltak CTC-re, és nagyon kicsi HCC-csomókat észleltek 3-tól 5 hónapos követés. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou és munkatársai azt találták, hogy az emelkedett EpCAM+ CTC-vel és szabályozó T-sejtekkel rendelkező betegeknél nagyobb volt a HCC kiújulásának kockázata, mint az alacsony CTC-vel rendelkező betegeknél, a kiújulási arány 66,7% vs 10,3% (P<0,001)67.Hasonló vizsgálatot végeztek Zhong et al.68. Ezenkívül Qi azt találta, hogy 112 HCC-s beteg közül 101-nek (90,81%), beleértve a korai betegségben szenvedőket is, volt CTC, és nagyon kicsi HCC-csomókat észleltek 3-5 hónapos követés után. Zhou 等 人 发现 ， ， 与 ctc 数量 较 少 的 相比 ， ， ， EPCAM+ CTC 和 调节性 T 细胞 升高 的 患者 发生 发生 发生 复发 的 更 ， ， ， ， 分别 66,7% 和 10,3% (p <0,001)。 风险 高 ， ， 复发率 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 分别 Zhou 等 人 发现 与 与 与 与 与 数量 少 的 患者 ， ， EPCAM+ CTC 和 T 细胞 数量 患者 发生 HCC 复发 ， ， ， 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 分别 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为p <0,001)…………………………………………… Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.azt találták, hogy az emelkedett EpCAM+ CTC-vel és szabályozó T-sejtekkel rendelkező betegeknél nagyobb volt a HCC kiújulásának kockázata, mint a kevesebb CTC-vel rendelkező betegeknél, a kiújulási arány 66,7%, illetve 10,3% volt (P < 0,001).Hasonló vizsgálatról számoltak be Zhong et al.68 Ezenkívül Qi azt találta, hogy a 112 HCC-beteg közül 101-nél (90,81%), beleértve a korai betegségben szenvedőket is, pozitív CTC-eredmény volt, és nagyon kicsi HCC-csomókat talált 3 látogatás után.Megfigyelés 5 hónapig.Ezenkívül 12 krónikus HBV-fertőzésben szenvedő betegnél találtak CTC-t, és 2 CTC-pozitív betegnél 5 hónapon belül kis HCC-daganatokat találtak.69 Így a CTC-k felhasználhatók a HCC előrejelzésére, 70 de rutinszerűen használhatók prediktív biomarkerként.
A cfDNS-hez hasonlóan a cfRNS is különböző rendszereken keresztül kerül a véráramba.Ezek a molekulák a perifériás vérben a kiindulási rákos szövetet képviselik.A nem invazív módszerekkel kimutatott markerekhez képest a cfRNS-ek dinamikusabban szabályozottak, szövetspecifikusabbak és bőségesebbek az extracelluláris környezetben.A HCC-ben 71 miRNS (miRNS) jelentőségéről és diagnosztikai értékéről számos tanulmány számolt be.A miRNS-ek endogén, nem kódoló RNS-ek (ncRNS-ek), amelyek a célhírvivő RNS-ek (mRNS-ek) transzlációjának gátlásával szabályozzák a különböző molekuláris biológiai aktivitásokat.A miRNS-ek apoptotikus testekben helyezkednek el, exoszómákba zárva, de stabilan kötődhetnek a perifériás vérben lévő szérumfehérjékhez és lipidekhez is, és felhasználhatók a HCC értékelésére.A mikroRNS-ek részt vesznek a máj regenerációjában, a lipid anyagcserében, az apoptózisban, a gyulladásban és a HCC kialakulásában.72 Az onkogén miRNS-ek, mint például a miR-21, miR-155 és miR-221, jól ismertek a HCC-ben.A miR-21 különösen fontos szerepet játszik az extracelluláris mátrix kollagénszintézisében és a fibrózisban, és a hematopoietikus őssejtek aktiválásával elősegíti a hepatocarcinogenezist.72,73 A HCC-ben található tumorszuppresszor miRNS-ek közé tartozik a miRNS-122, a miRNS-29, a Let-7 család és a miRNS-15 család.A Let-7 család számos tumorszuppresszor miRNS-ből áll, amelyek a RAS családot célozzák.A miR-15 családba tartozik a miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 és miR-497, amelyek komplementer szekvenciákkal rendelkeznek bizonyos mRNS-ekhez.Emellett a hosszú, nem kódoló RNS-ek (lncRNS-ek) és a cirkuláris RNS-ek (cirRNS-ek) is fontosak a HCC korai szűrésében.Az lncRNS-ek az ncRNS-ek legszélesebb osztályát képviselik, beleértve az mRNS-szerű ncRNS-eket, és számos emberi betegség patogenezisében vesznek részt.Az LncRNS-ek szabályozó szerepet játszanak a máj mikrokörnyezetében és a krónikus májbetegségben.74 A CircRNS-ek szintén az ncRNS-ek egy osztálya, amelyek több funkciót is ellátnak a génexpresszió szabályozásában.A közelmúltban a cirkRNS-eket a HCC diagnosztikai eszközeinek tekintették.
A keringő szabad RNS figyelemreméltó stabilitással rendelkezik, beleértve a hőmérséklettel, pH-val és RNázzal szembeni ellenállást, ami kevésbé fárasztóvá teszi az fnRNS izolálását a perifériás vérből a szokásos RNS-tisztítási módszerek alkalmazásával.A leggyakrabban használt módszerek közé tartozik az NGS, a microarray és az RT-qPCR.Az NGS lehetővé teszi a mikroRNS-ek mérését az egész genomban.Ez a módszer azonban drága, és az elemzés nem szabványos.Ezzel szemben az RT-qPCR olcsó, gyorsan amplifikálja a nukleinsavakat, és számos előnnyel jár, mint például a nagyobb érzékenység, nagyobb pontosság, szélesebb dinamikatartomány és kevesebb minta igénye.A microarray egy másik módszer a miRNS kimutatására, amely a célmiRNS-ek érzékeny és specifikus hibridizációján alapul komplementer DNS-próbákkal, 75 de a microarray adatok elemzése időigényes.
A keringő miR-122 és Let-7 potenciálisan hasznos lehet a korai stádiumú HCC diagnosztizálásában magas kockázatú csoportokban, markerek a HBV-vel összefüggő premalignus csomókban és korai stádiumú HCC-ben szenvedő betegeknél.76 Cai et al.megállapította, hogy a Let-7 család tagjai (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 és miR-199a/b) a krónikus betegségek kockázatának vannak kitéve. HCC hepatitisben szenvedő betegeknél.A Let-7 család hatékony helyettesítő biomarkerként szolgálhat a HCC kialakulásának előrejelzésére a krónikus hepatitis C-vel összefüggő magas kockázatú csoportokban. A 77 miR-122 nagy diagnosztikai pontossággal rendelkezik a májcirrhosisban szenvedő betegek korai HCC kimutatásában.78 A szérumban keringő MiR-107-et a HCC korai szakaszában is értékelték, 79 és jó potenciált mutatott a magas kockázatú populációkban.Zhou és munkatársai arról számoltak be, hogy a miRNS-ek panelje (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a és miR-801) képes megkülönböztetni a HCC-t a krónikus hepatitis B-től (CHB) és a cirrhosistól. az érzékenység 79,1% és 75%, a specificitás 76,4% és 91,1% volt.80 A HBV-vel kapcsolatos HCC-ben azt találtuk, hogy a miR150 szintek szignifikánsan csökkentek a HCC nélküli krónikus HBV-betegekéhez képest (szenzitivitás 79,1%, specificitás 76,5%).A -224 emelkedett volt a HCC-ben az egészséges kontrollokhoz képest, és az alcsoport-analízisek magasabb szintet mutattak a HBV-vel összefüggő HCC-ben szenvedő betegeknél.hepatitis B-vel összefüggő cirrhosisban és HCC-ben szenvedő betegek azonosítottak egy siRNS-osztályozót, amely hét eltérően expresszálódó siRNS-t tartalmaz, amely képes kimutatni a HCC-t különböző kontrollokban;Az AUC-tartomány a korai szűrésnél jobb, mint az AFP önkénteseké.Azt találták, hogy négy miRNS (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p és miR-365a-3p) meg tudja különböztetni a HCC-s betegeket a HCC-vel nem rendelkezőktől.Öt túlzottan expresszáló miRNS (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p és miR-148a-3p) potenciális HBV fertőzésnek tekinthető HCC, cirrhosis és CHB biomarkerekben, különösen A miR-34a-5p biomarker lehet a májcirrózisban85, és potenciális biomarker lehet a HCC korai szűrésében a magas kockázatú populációkban.A HCC-ben leginkább vizsgált lncRNS erősen aktiválódik májrákban (HULC).Más tanulmányok kimutatták, hogy a HCC-s betegekben keringő HULC diagnosztikai markerként használható, mivel ez az lncRNS erősen felszabályozott HCC-s betegekben az egészséges egyénekhez képest.71,86 Más lnRNS-ek között a LINC00152-t tartják a legjobb diagnosztikai lncRNS-nek magas AUC, érzékenysége és specificitása miatt.86 Egy vizsgálatban a LINC00152 perifériás vér expressziója fokozatosan nőtt a normál egészséges kontrolloktól a CHB-ben és cirrhosisban szenvedő betegek felé, és végül a HCC-ben volt a legmagasabb.A circSMARCA5 expressziójának vizsgálata HCC-ben szenvedő betegek plazmájában a HCC expressziójának progresszív csökkenését mutatta ki, a hepatitistől a cirrhosisig és a rákmegelőző elváltozásokig.87 A ROC görbék elemzése megerősítette ezeknek a cirRNS-eknek a potenciálját a hepatitisben vagy májcirrhosisban szenvedő betegek és a HCC-s betegek megkülönböztetésében, különösen azoknál, akiknek AFP szintje 200 ng/ml alatt van.Ezenkívül Zhu 13 617 ciklikus RNS-t elemzett HBV-vel asszociált HCC-betegek plazmamintáiban, és megerősítette, hogy 6 ciklikus RNS eltérően expresszálódik HCC-ben és HBV-vel összefüggő cirrhosisban, ami arra utal, hogy a cRNS-ek előnyösek lehetnek.markerek a magas kockázatú csoportok korai szűrésére, például a májbetegséggel, szklerózisban szenvedő betegekkel.88
Az exoszómák 40-160 nm átmérőjű membránvezikulák;több intracelluláris vezikula egyesül a sejtmembránnal, és felszabadul az extracelluláris mátrixba.Számos aktív komponenst tartalmaznak, beleértve a lipideket, fehérjéket, RNS-t és DNS-t, és kulcsszerepet játszanak a sejtek közötti kommunikációban, mind a HCC, mind a nem HCC sejtek között.89,90 Az exoszómák a hepatocita fibroblasztok és a csillagsejtek, az immunsejtek, a normál hepatociták és a HCC sejtek aktiválásával szabályozzák a HCC progresszióját.91 A tumor mikrokörnyezetében a daganatsejtek nagyszámú exoszómát termelnek, amelyek a rákos sejtekből az éretlen sejtekbe kerülnek, amelyek viszont részt vesznek az onkogenezisben, a lebontásban és a sejtjelátvitelben.92 Tanulmányok kimutatták, hogy az exoszómák a kóros folyamatok során átvihetik az onkogéneket a normál sejtekbe, ami a tumorinvázió és a metasztázis egyik mechanizmusa lehet.93 Az exoszómák szerepe a rák progressziójában dinamikus és ráktípusra specifikus lehet, 89 Az exoszómákat a szomszédos vagy távoli sejtek internalizálhatják, hogy szabályozzák a recipiens sejtekben található több célgént, amelyek részt vehetnek a sejtközi kommunikációs ionokban és a sejtes mikrokörnyezet kölcsönhatásaiban. közvetítik a sejtes jelátvitelt és az anyagcserét.94 Az exoszóma rakománymolekulák jellemzői és dinamikus változásai közvetlenül tükrözik a szülői daganatsejtek jellemzőit és dinamikus változásait,95 ami egyben az exoszómák felhasználásának alapja a rák diagnosztizálásában és prognózisában, valamint a rákellenes terápiára adott egyéni válasz előrejelzésében. ..96
Az exoszómák izolálására és elemzésére szolgáló hagyományos laboratóriumi módszerek összetettek, többlépésesek és időigényesek, beleértve az ultracentrifugálást, szűrést, méretkizárásos kromatográfiát, immunaffinitás-tisztítást, Western-blot-t, enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA), PCR-t és áramlásanalízist.A mikro-/nanotechnológiát alkalmazó miniatürizált rendszereket és a chipen működő laboratóriumi platformokat széles körben fejlesztik az exoszómák gyors és kényelmes in situ izolálására.A nanorészecskék nyomkövetési elemzése (NTA) egy széles körben használt módszer az exoszómák méretének és koncentrációjának jellemzésére, beleértve az olyan módszereket, mint a mágneses nanorészecskék és a polihidroxi-alkanoátok.Mikrofluidikus és elektrokémiai módszerekkel is gyorsan kimutathatóak az exoszómák, nagy hozamok mellett.
Az exoszomális fehérjék fontos markerek a HCC diagnózisában.Az Arbelaiz vizsgálatban a 98-as RasGAP SH3-kötő fehérje (G3BP) és a polimer immunglobulin receptor (PIGR) szintje szignifikánsan megemelkedett a HCC-eredetű exoszómákban, és a két fehérje feltételezett kombinált hatékonysága jobb volt, mint az AFP-é.A vastúlterhelés fontos tényező, amely hozzájárul a HCC kialakulásához.Tseng arról számolt be, hogy a hepcidin kulcsszerepet játszhat a HCC-vel szembeni rezisztenciában.99 A HCC-s betegek szérumából származó exoszómák szignifikánsan magasabb kópiaszámmal rendelkeztek a hepcidin mRNS variánsaiban, mint egészséges társaik, ami arra utal, hogy a hepcidin a HCC új diagnosztikai biomarkere lehet.A 100 HCC által termelt exoszómákban található 14-3-3ζ fehérje csökkentheti a T-sejtek aktivációját, proliferációját és differenciálódását, és indukálhatja a T-sejtek szabályozó T-sejtekké történő átalakulását, ami T-sejt-kiürülést eredményez.101 Ezt több tanulmány is alátámasztja, amelyek az immunrendszer felügyelete alóli tumorelkerülést vizsgálják, 102 amelyek hozzájárulhatnak a HCC tumorigeneziséhez.
Az ecRNS plazmában vagy szérumban való jelenléte mellett az RNS-ben dúsított exoszómák nem invazív, valós idejű stádiummeghatározásra is használhatók a korai tumorszűrés során, valamint a tumor evolúciójának és terápiára adott válaszának meghatározására.Az exoszomális miRNS-21 szintje a vérszérumban a HCC csoportban 2,21-szer magasabb volt, mint a CHB csoportban, és a HCC csoportban 5,57-szer magasabb, mint az egészséges populációban.A Wang-vizsgálatban az exoszómák szignifikánsan növelték a HCC-t 0,83 (95% CI 0,74–0,93) és 0,94 (95% CI 0,88–1,00) AUC-értékkel rendelkező cirrhoticus betegekhez képest.104 A kapott adatok rávilágítottak specifikus exoszomális rakománymolekulák szerepére az onkogenezis és a HCC progresszió szabályozásában.105 A miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 és miR-26a szérum expressziója konzisztens.A miR21 szintje sokkal magasabb volt HCC-s betegekben, mint egészséges kontrollokban és CHB-betegekben is.102 Az LncRNS-nek potenciális diagnosztikus értéke volt HCC-ben.Tanulmányok kimutatták, hogy a HCC-s betegek szérumából származó exoszómákban szignifikánsan magasabb a növekedési faktor-β transzformációja által aktivált LINC00161, LINC000635 és lncRNS szintje, mint a HCC-vel nem rendelkező betegekben, és ezek az lncRNS-ek szorosan összefüggenek a TNM stádiumával és a tumor térfogatával.110 Conigliaro et al.Azt találták, hogy a CD90+ exoszómák magas szintű lncRNAH19-et expresszálnak, ami szignifikánsan növelte a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF) felszabadulását és a VEGF-R1 receptor termelését, ezáltal serkentve az angiogenezist.93 A CircRNS-ek az exoszomális ncRNS-ek egy másik típusa – alacsonyabb, de stabil szinten expresszálódnak a fajok között.A 111 cirRNS a korai és minimálisan invazív rák diagnosztikai biomarkerei.112 A legújabb klinikai vizsgálatok kimutatták, hogy az egyes miRNS-ek specifitása a HCC előrejelzésében nem ideális.Ezért a komplex kimutatás több teszttel (pl. miR-122 és miR-48a AFP-vel kombinálva) javíthatja a korai HCC azonosítását és a HCC elkülönítését a cirrhosistól.100
A CHB-ben és májcirrhosisban szenvedő betegek a HCC kialakulásának leggyakoribb magas kockázati csoportja.A magas kockázatú csoportok esetében a tartós virológiai válasz elérése után költséghatékony, a HCC kockázatán alapuló felügyeleti stratégiát kell kidolgozni, és a korai szűrés a kulcsa a HCC diagnózisának és kezelésének magas költséghatékonysági aránnyal történő javításának2. ..A rák korai szűrési módszereinek számos korlátja van: a legtöbb ráktípusra nem dolgoztak ki hatékony korai szűrési módszereket, és az adherencia általában alacsony.A hagyományos korai szűrési módszerekkel összehasonlítva a folyékony biopsziás technológiának nyilvánvaló előnyei vannak: könnyű mintavétel, panrac kimutatás, jó minta reprodukálhatóság és hatékony válasz a tumor heterogenitására.Tekintettel a folyékony biopsziával kapcsolatos módszerek költséghatékonyságára, alkalmazásukat a HCC-szűrésben rutinszerűen nem tesztelték.A molekuláris szintű pontos detektálás terén elért előrehaladás ellenére a folyadékbiopszia költséges a HCC kimutatása célbetegekben, ami korlátozza annak széles körű alkalmazását az olyan speciális képalkotó eljárásokhoz képest, mint az ultrahang és a mágneses rezonancia képalkotás.113 114 Egy korábbi tanulmány azonban kimutatta, hogy a folyékony biopszia jelentős előnyöket mutatott a minőségileg korrigált életévek (QALY) tekintetében.115 A folyékony biopszia előnyeit a gyomor és a nasopharynx korai karcinómájában is kimutatták.116 117 A jelenlegi nézet szerint a folyékony biopszia kiegészítheti a szérum biomarkereket és a radiológiai szűrést a daganatok kimutatásában és diagnosztizálásában.117 118
A jelenlegi szakirodalom szerint a folyadékbiopsziás technológia szignifikánsan nagyobb szenzitivitást és specificitást mutatott a májrák magas kockázatú csoportjainak korai szűrésében.A folyadékbiopszia típusától függetlenül meg tudja különböztetni a HCC-t a magas kockázatú HCC-vel nem rendelkező egyénektől, ami a korai szűrés fontosságára utal, mivel nyilvánvalóak a különbségek a magas kockázatú és az egészséges egyének között.A ctDNS felezési ideje rövid, és HCC kimutatására használható, így a tumor eredetű cDNS-ben bekövetkezett bármilyen változás valós idejű konkrét bizonyítékot szolgáltathat a tumor progressziójára, különösen kisméretű daganatok esetében.A ctDNS magas szintje a rák kialakulását és terjedését jelzi, és a progresszió és a kiújulás korai mutatója.Ezenkívül a ctDNS eredményei alapján a betegek személyre szabott kezelést és nyomon követést kaphatnak.119 A specifikus metilációs helyek jobb markerek lehetnek, mint az AFP a HCC és a cirrhoticus csomók korai azonosítására.A HCC reszekálható eseteiben a magas cDNS szint mikrovaszkuláris inváziót és posztoperatív recidívát és metasztázist jelez.A kópiaszám változása a HCC-s betegek túlélésével függ össze.Feltételezhető, hogy a cDNS kiértékelés szerepet játszhat a HCC átfogó kezelésében, és a cDNS a terápiás moduláció hatékony indikátoraként szolgálhat.A ctDNS specifikus genetikai mutációin alapuló markereket a klinikai irányelvek elfogadták a hatékonyság előrejelzésére és a gyógyszerrezisztencia monitorozására.A ctDNS vizsgálat lehet a leghasznosabb folyékony biopsziás eszköz a korai szűréshez.A CTC-k kulcsszerepet játszanak a magas kockázatú HCC-csoportok korai szűrésében is.A HCC-vel összefüggő CTC-k különböző markerei különösen fontosak a HCC kialakulásában, kialakulásában és kiújulásában.Membránvezikulákként az exoszómák részt vesznek az intercelluláris kommunikációban, különösen a HCC sejtekben.A keringő mikroRNS-ek stabilak a vérben, így hasznosabbak lehetnek a HCC korai szűrésére.Fokozatosan felfedezték az exoszomális fehérjéket és az RNS-ben gazdag exoszómákat, és megerősítették a HCC-re vonatkozó prediktív hatékonyságukat.Érdekes módon a HCC különböző etiológiái különböző mutációkkal is összefüggésbe hozhatók, így a korai szűréshez különböző biomarkereket tudunk kiválasztani a HCC különböző etiológiái alapján.120
A jelenlegi folyadékbiopsziás technikák azonban megkérdőjelezhetőek a stabilitás szempontjából, és nem képesek önállóan elvégezni a HCC korai szűrését vagy monitorozását, de továbbra is kiegészíthetik az egyéni szűrést és diagnózist.121 A folyékony biopszia egyik formájaként a ctDNS, CTC, cfRNS és az exoszóma-asszociált AFP vagy PIVKA-II kimutatása és képalkotása ígéretesen alkalmazható a HCC korai diagnózisában és prognózisában.A ctDNS vérbe történő felszabadulásának pontos mechanizmusát azonban még tisztázni kell.A ctDNS alapvető biológiai tulajdonságainak feltárása megkönnyítheti markerként való használatát.A keringésben lévő kis mennyiségű ctDNS és a szigorú mintakezelési követelmények kihívást jelentenek a cDNS kimutatásának klinikai megvalósításában HCC-ben.Ezenkívül a genetikai mutációk nem rendelkeznek olyan specifikus jellemzőkkel, amelyek lehetővé teszik a rákkeltő anyagok pontos azonosítását.Mivel több genetikai és szomatikus változat is jelen van a normál szövetekben, a folyadékbiopsziával azonosított genetikai mutációk korlátozottan használhatók a HCC korai szűrésében.122 A cDNS használatának legfontosabb kérdései a jól meghatározott hasznos géncélpontok és a biomarkerek korlátai, amelyek segítenek megkülönböztetni a cDNS-t a nem tumoros DNS-től.az érzékeny és specifikus markerek hasznosságának hiánya a CTC-k kimutatására.Csak metasztatikus potenciállal rendelkező életképes sejteket találtunk, és a CSC-vel dúsított markerek optimális kombinációja nem volt egyértelmű.A CTC-k izolálása tenyésztéshez és mutációs profiljuk értékeléséhez szintén kihívást jelent.Az exoszómák azonosításával, izolálásával és tisztításával kapcsolatos problémák miatt a specifikus molekuláris mechanizmus még mindig nem tisztázott, és az exoszómák és a HCC mechanizmusával kapcsolatos korábbi tanulmányok nem voltak mélyrehatóak, és a miRNS-ek, lncRNS-ek és fehérjék exoszómákba válogatásának módja nem volt mélyreható. , és nem világos, hogy az exoszóma felvétel egy adott típusú folyamat-e.Az exoszómák alkalmazása a HCC diagnosztizálására és kezelésére még mindig a preklinikai stádiumban van.A folyékony biopsziás eljárások szabványosításának hiánya, például a vérvételre használt csövek típusa, a vértérfogat, a minták tárolása és kimutatása, izolálása és dúsítása, az orvosi központok gyakorlatának különbségei miatt kizárhatja a rutin klinikai gyakorlatban való alkalmazásukat.A folyékony biopszia hatékonysága a HCC korai szűrésében, diagnózisában, hatékonyságának értékelésében és előrejelzésében még feltárásra vár, különösen a magas kockázatú csoportok esetében.A folyékony biopsziás technológia nagy lehetőségeket rejt magában, és várhatóan a közeljövőben széles körben alkalmazzák a májrák klinikai gyakorlatában.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Globális rákstatisztika 2020: A GLOBOCAN 36 ráktípus előfordulását és halálozását becsüli 185 országban.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Az Országos Egészségügyi Bizottság székhelye.Az elsődleges májrák diagnózisának és kezelésének kritériumai (2022-es kiadás) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z és mtsai.Útmutató a hepatocelluláris karcinóma diagnosztizálásához és kezeléséhez (2019-es kiadás).Májrák.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K és mtsai.A hepatocelluláris karcinóma klinikai gyakorlati irányelvei: Japanese Society for Liver Diseases, 2017 (JSH-HCC 4th Guidelines), 2019-es frissítés.Májbetegség-tározó.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Folyékony biopszia krónikus májbetegségben.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Folyékony mellrák biopszia: fókuszált áttekintés.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG A hepatocelluláris karcinóma felügyelete: jelenlegi legjobb gyakorlatok és jövőbeli irányok.Gasztroenterológia.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Klinikai irányelvek EASL-EORTC: hepatocelluláris karcinóma kezelése.J Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Az AFP és a HCCR-1 kombinált elemzése, mint hasznos szerológiai markerek kis hepatocelluláris karcinómában: prospektív kohorsz vizsgálat.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S és mtsai.A plazma mikroRNS-125b differenciált expressziója hepatitis B vírussal összefüggő májbetegségben és a hepatitis B vírus által kiváltott hepatocelluláris karcinóma diagnosztikai potenciálja.Májbetegség rezervoár.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Az alfa-fetoprotein biológiája és jelentősége hepatocelluláris karcinómában.Máj int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N és mtsai.Klinikai irányelvek a hepatocelluláris karcinóma kezelésére az ázsiai-csendes-óceáni régióban: 2017-es frissítés.Nemzetközi Májbetegségek Szervezete.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.A szérum PIVKA-II diagnosztikai értéke önmagában vagy AFP-vel kombinálva hepatocelluláris karcinómában szenvedő kínai betegeknél.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Nem kissejtes tüdőrák nem plazma humorális folyadék biopszia: közelebb a daganathoz!sejt.2020;9(11).doi: 10,3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Folyékony biopszia: jelenlegi állapot és jövőbeli kilátások.Kezelés Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P és mtsai.Folyadék alapú rákbiopszia: multimodális diagnosztikai eszköz a klinikai onkológiában.Az Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleinsavak emberi plazmában.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Pikorz AM, et al.A keringő tumor DNS fejlett kimutatása fragmentumméret-analízissel.A tudomány lefordítja az orvostudományt.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Keringő tumor DNS fragmentum hossza.PLOS gének.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Keringő tumor DNS: ígéretes biomarker folyadék alapú rákbiopsziában.céldaganat.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.A keringő tumor DNS kimutatása az emberi rosszindulatú daganatok korai és késői szakaszában.A tudomány lefordítja az orvostudományt.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Folyékony biopszia a szilárd rák mutációs prediktív elemzéséhez: a patológus szemszögéből.J Biotechnológia.2019; 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Korai daganatfelismerés keringő plazma DNS-szűréssel: hype vagy remény?Belga klinikai jog.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. A hepatitis vírus és az öregedés hatása a DNS-metilációra a humán hepatokarcinogenezisben.Szövettan.2010;25(5):647–654.doi: 10,14670/HH-25,647